Establishment of time-resolved fluorescence immunochromatographic method for Toxoplasma gondii detection

Abstract

Toxoplasma gondii (T. gondii) is a parasitic zoonosis that causes abortion or congenital diseases. The purpose of this study is to establish a immunochromatographic assay (ICA) method using time-resolved fluorescence microspheres (TRFM) for T. gondii quantitative detection in serum. Firstly, we activated the TRFM and then coupled with anti-T. gondii antibodies (mAb1) and anti-BSA-DNP antibodies to prepare the TRFM-mAb1 probes and TRFM-BSA-DNP probes. Then, we optimized the coupling pH, T line antibody concentration, probes usage and detection time. Finally, we established the T. gondii-TRFMICA method and assemble the T. gondii-TRFMICA kit, the standard curve, sensitivity, precision, specificity, clinical sensitivity and specificity were evaluated. Under the optimized conditions, the T. gondii-TRFMICA test was achieved within 20 min with the sensitivity 0.1 ng/mL. The recoveries were ranging from 100–110% with the intra-assay and inter-assay CV lower than 10%. The kits have detection specificity for positive serum of several common infectious diseases and some common serum components, and have high detection sensitivity and specificity in human and cat clinical samples. A TRFMICA kit for T. gondii quantitative detection was successfully prepared with high sensitivity, specificity, precision and clinical sensitivity and specificity. We recommend TRFMICA as a promising technique in the clinical diagnosis and monitoring of toxoplasmosis in human and animals

Toxoplasma gondii (T. gondii) – паразитарный зооноз, вызывающий выкидыши или некоторые врожденные заболевания. Целью данного исследования является разработка метода иммунохроматографического анализа (ICA) с использованием флуоресцентных микросфер с временным разрешением (TRFM) для количественного обнаружения T. gondii в сыворотке крови. Для исследования сначала активировали TRFM, а затем связали с антителами против T. gondii (mAb1) и антителами против BSA-DNP для приготовления зондов TRFM-mAb1 и зондов TRFM-BSA-DNP. После оптимизировали pH, концентрацию антител Т-линии, использование зондов и время обнаружения. Наконец разработали метод T. gondii-TRFMICA и сформировали набор T. gondii-TRFMICA, оценили линейность, чувствительность, прецизионность, специфичность, а также клинические чувствительность и специфичность. При оптимальных условиях тест T. gondii-TRFMICA выполнялся в течение 20 мин с чувствительностью 0,1 нг/мл. Открываемость составляла от 100 до 110%, при этом внутрилабораторный и межлабораторный коэффициент вариации был ниже 10%. Наборы обладают пецифичностью обнаружения нескольких распространенных инфекционных заболеваний в клинических образцах человека и кошек. Набор TRFMICA для количественного обнаружения T. gondii успешно создан и обладает высокой чувствительностью, специфичностью, прецизионностью, а также клиническими чувствительностью и специфичностью. Набор TRFMICA рекомендуем как перспективный метод клинической диагностики и мониторинга токсоплазмоза у человека и животных