Establishment of an indirect elisa method for detecting canine distemper virus antibodies

Abstract

Canine distemper virus (CDV) can cause acute infectious diseases in various carnivorous animals. This study aims to develop an indirect ELISA method for CDV antibody detecting. Using the purified recombinant CDV antigens as coating agents, and after optimizing the conditions, a preliminary ELISA detection method for CDV specific antibodies was established. The optimal coating concentration of recombinant CDV antigen at 2,0 μg/mL 100 μL/well, overnight coating at 4 °C, blocking at 4 °C for 4 h, serum dilution at 1: 200 and incubation at 37 °C for 1,5 h or 2 h, or 4 °C overnight. No cross-reactivity was observed with CPIV, CAV-1, and CCV antibody-positive serum, indicating good specificity. Both intra-batch and inter-batch CVs were below 5 %, and the detection sensitivity reached 1:500.

Вирус чумы собак (CDV) может вызывать острые инфекционные заболевания у различных плотоядных животных. Целью данного исследования является разработка непрямого метода ИФА для обнаружения антител к CDV. Используя очищенные рекомбинантные антигены CDV в качестве покрывающих агентов и после оптимизации условий, был разработан предварительный метод ELISA-детектирования антител, специфичных к CDV. Оптимальная концентрация рекомбинантного антигена CDV в покрытии при 2,0 мкг/мл, 100 мкл/лунка, нанесение покрытия на ночь при 4 °C, блокирование при температуре 4 °C в течение 4 часов, разведение сыворотки 1:200 и инкубация при температуре 37 °C в течение 1,5 часов или 2 часов либо 4 °C в течение ночи. Перекрестной реактивности с сывороткой, положительной по антителам к CPIV, CAV-1 и CCV, не наблюдалось, что указывает на хорошую специфичность. Коэффициент вариации как внутри, так и между партиями был ниже 5 %, а чувствительность обнаружения достигала 1:500.